Молекулярне клонування

📋 TL;DR

Класика: рестрикційне клонування з лігазою T4.

Безшовні методи: Gibson Assembly, Golden Gate, In-Fusion.

Вектори: плазміди, BAC/YAC, вірусні системи.

Верифікація: колонийний PCR, Sanger, NGS.

Застосування: експресія білків, синтетична біологія, генна терапія.

🧪 Компоненти

Рестриктази і лігази

Праймери з надлишками та сайтами

Вектори зі старт/стоп, селекцією і промотором

Компетентні клітини, системи доставки

🧱 Протоколи

Рестрикційне клонування

Розрізання вектора й вставки комплементарними ферментами.

Очищення, лігування, трансформація.

Селекція та скринінг колоній.

Gibson Assembly

Однокрокова ізотермічна реакція екзонуклеази, полімерази та лігази для елеменів з перекриттями.

Golden Gate

Тип IIS рестриктази (BsaI/BsmBI) забезпечують модульну збірку без «шрамів».

🛠️ Приклади

Клонування ORF у експресійний вектор.

Збірка багатогенних касет для метаболічної інженерії.

Створення бібліотек мутагенезу.

Спробуйте наживо

Усе, що вище, працює прямо у вашому браузері — відкрийте Michaelis-Menten Kinetics і змінюйте параметри під час роботи. Нічого не встановлюється, нічого не завантажується на сервер, уся модель живе в одній вкладці.